imtoken官网钱包下载网址|石斑鱼神经坏死病毒

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2024-03-08 19:45:17

传染性强、死亡率高的石斑鱼神经坏死病毒,终于找到预防方案了! - 知乎

传染性强、死亡率高的石斑鱼神经坏死病毒,终于找到预防方案了! - 知乎切换模式写文章登录/注册传染性强、死亡率高的石斑鱼神经坏死病毒,终于找到预防方案了!龙昌水产磊哥神经坏死病是由于神经坏死病毒入侵鱼体,导致鱼脑、视网膜、鱼中枢神经等神经系统坏死的病毒,它传染性强、死亡率高,最近在江西等地暴发严重,致使鳜鱼和石斑鱼养殖户损失惨重。石斑鱼患病后主要表现症状为身体发黑、腹部肿胀向上漂浮在水面、在水面狂游或呈螺旋状,游泳、厌食甚至停食、死亡。发病初期脾脏鲜红,随着病情加重逐渐肿大,脾脏发黑或呈暗红色。部分鱼苗鳔胀气;肠道积水,往往伴随白便、绿便;肝脏萎缩、贫血等。鱼体头大而身小、形体消瘦。江西老板发现自家的石斑鱼出现肛门后边的皮肉出现透明色,而且鱼也在不断的打转、游边,一开始以为寄生虫,镜检没有虫,也找了不少朋友,搜了不少的资料,消毒剂、抗生素都用过,没有任何效果。根据症状从网上搜的,只有鲈鱼的熟身病是比较相似的,在沟通过程中发现有一部分鱼突然发疯似的到处乱窜,然后就死亡了,这是很典型的神经坏死病毒引起的。处理建议1、循环水的养殖不要继续循环,定期补充新水,把水源更换掉,保证水源的安全,配合碘制剂使用2、有半死不活的鱼要及时捕捞出来,因为鱼在死亡的一瞬间病毒会快速发散出去。3、泼洒龙昌幸福100+VC来增强鱼的体质,减缓鱼的损耗问题,如果鱼还吃料可以配合胆汁酸、幸福100拌料使用文章来源于微信公众号加州鲈鱼前沿发布于 2024-01-09 13:54・IP 属地日本神经生物​赞同​​添加评论​分享​喜欢​收藏​申请

秦启伟教授团队在海水鱼类神经坏死病毒感染致病机制研究上取得重要突破

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秦启伟教授团队在海水鱼类神经坏死病毒感染致病机制研究上取得重要突破

发布时间:2021-07-09 作者: 阅读次数:1161

近日,我校海洋学院秦启伟教授团队利用单细胞测序技术等手段破译了RGNNV感染石斑鱼中枢神经系统的细胞类型,揭示了病毒感染导致宿主细胞死亡机制。研究成果发表在国际病原学权威学术期刊《PloS Pathogens》,题目为“Single-cell RNA-seq landscape midbrain cell responses to red spotted grouper nervous necrosis virus infection”。(论文在线网址:https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1009665)。该论文解析了石斑鱼中脑神经细胞的类型,深入了解了神经坏死病毒攻击的细胞类型,致病机制和宿主抵抗病毒的方式,导致神经细胞死亡的可能途径,为进一步研究病毒如何感染硬骨鱼中枢神经系统提供了基础。神经坏死病毒(Nervous Necrosis Virus,NNV) 是最严重的海洋鱼类病毒性病原之一,在全球范围内可感染导致超过50种海水鱼类死亡,尤其对仔鱼和幼鱼危害很大,感染后一周内死亡率可达100%。NNV是一种正链RNA病毒,属于野田村病毒科,NNV可分为四种基因型: 分别为拟鲹NNV(SJNNV)、红鳍东方鲀NNV(TPNNV)、条斑星鲽NNV (BFNNV)和赤点石斑鱼NNV(RGNNV)。NNV已成为世界范围内养殖鱼类最重要的威胁之一,且近年受感染的鱼类种类和受危害程度迅速增加,研究其致病机理和宿主的抵抗机制意义重大。NNV主要感染鱼类中枢神经系统和视网膜神经系统,而中枢神经系统细胞组成复杂且功能多样性,因此很难识别病毒靶向感染攻击的特定类型细胞。以石斑鱼为研究对象,通过原位杂交示踪发现RGNNV主要感染石斑鱼的中脑部位。对感染鱼和未感染鱼的中脑进行单细胞测序,鉴定出35种不同细胞亚型,包括28种神经元细胞和7种非神经元细胞类型。针对不同亚群细胞,通过双色荧光原位杂交发现RGNNV攻击的细胞类型为GLU1和GLU3神经细胞,进一步对这两类细胞进行差异分析,发现与膜形成、裂解和转移的通路在感染组中显著富集,同时,胞质液泡形成和凋亡相关基因在这两类细胞中显著高表达,这可能是导致细胞死亡的原因。此外,针对非神经元细胞中的免疫细胞分析发现病毒感染后,石斑鱼脑中巨噬细胞数目显著增多,进一步分析发现,病毒感染后在中脑组织小神经胶质细胞向M1型巨噬细胞转化并产生炎症细胞因子,以减少病毒对神经组织的损伤。海洋学院青年教师王庆为论文的第一作者,赵会宏副教授和秦启伟教授为通讯作者。该研究工作得到了国家自然科学基金项目 (U20A20102、31930115,41806151,31972768),以及广州市科技计划项目 (202002030206)的资助。 (文/图:海洋学院王庆)

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Journal of Virology在线刊发实验室关于石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白B细胞中和表位的最新成果

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Journal of Virology在线刊发实验室关于石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白B细胞中和表位的最新成果

发布时间:2023-05-21浏览次数:12

神经坏死病毒(NNV)是一种世界范围内流行,严重危害多种海水和淡水鱼类的传染性病原。衣壳蛋白(CP)是该病毒唯一具有致病性和抗原性的结构蛋白,然而有关其免疫优势表位或中和功能位点的公开信息仍然极其缺乏。基于前期基础,本研究利用特异性抗石斑鱼NNV(RGNNV)CP的中和单克隆抗体,结合部分重叠的重组截短蛋白以及合成肽库,在CP中鉴定出两个分别位于S-domain和P-domain的最小B细胞表位122GYVAGFL128和227SLYNDSL233。氨基酸定点突变分析表明,Y123、G126、L128和L228、Y229、N230、D231、L233分别是介导表位与相应抗体直接互作的关键氨基酸残基。一系列生物信息学及系统进化分析显示,227SLYNDSL233在所有NNV基因型中几乎完全保守,暴露在病毒粒子表面突起的顶端周围,具有良好的免疫原性;而122GYVAGFL128在RGNNV以外基因型中具有大量抗原漂移,埋藏在病毒粒子壳区与突起连接处的凹槽中,免疫原性较差。体外封闭实验表明,SLYNDSL合成肽可减少GF-1细胞表面RGNNV的附着,进而抑制病毒的复制增殖,而GYVAGFL合成肽则无此封闭效果。综上所述,227SLYNDSL233是一个受体结合位点,相应抗体与之结合可阻断病毒粒子与易感细胞的粘附,进而产生中和效果;而122GYVAGFL128可能是一个稳定病毒粒子构象的脆弱区域,相应抗体与之结合后可破坏病毒的天然结构,进而产生中和效果。研究结果丰富了人们对NNV抗原分布模式和中和分子基础的理解,为推动研发针对NNV的高效抗病毒药物提供了新的靶点。该项工作于2023年1月12日以题为《Identification of B-Cell Epitopes on Capsid Protein Reveals Two Potential Neutralization Mechanisms in Red-Spotted Grouper Nervous Necrosis Virus》的论文发表在领域顶尖刊物《Journal of Virology》(IF=6.549)。中国海洋大学水产学院邢婧教授和战文斌教授为本文共同通讯作者,2020级博士研究生张志琪为第一完成人。该研究得到国家重点研发计划(2019YFD0900101、2019YFD0900102、2018YFD0900503)、国家自然科学基金(32173005、31730101、31672684、31672685)和山东省自然科学基金(ZR2020KC025)的支持。文章链接:https://journals.asm.org/doi/10.1128/jvi.01748-22图1 RGNNV CP中B细胞表位的鉴定图2 B细胞表位的生物信息学分析

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病毒性神经坏死病_百度百科

经坏死病_百度百科 网页新闻贴吧知道网盘图片视频地图文库资讯采购百科百度首页登录注册进入词条全站搜索帮助首页秒懂百科特色百科知识专题加入百科百科团队权威合作下载百科APP个人中心收藏查看我的收藏0有用+10病毒性神经坏死病播报讨论上传视频病毒性动物疾病本词条由“科普中国”科学百科词条编写与应用工作项目 审核 。病毒性神经坏死病(Viral nervous necrosis,VNN)又称病毒性脑病和视网膜病(Viral encephalopathy and retinopathy),二类传染病、寄生虫病。流行于除美洲和非洲外几乎世界所有地区的海水鱼类,对仔鱼和幼鱼危害很大,严重者在一周内死亡率可达100%,且近年受感染的鱼类种类和受危害程度迅速增加。 [1]中文名病毒性神经坏死病外文名Viral nervous necrosis又    称视网膜病严重者一周内死亡率可达100%发    展受危害程度迅速增加学    科海洋学目录1疾病简介2临床表现3治疗措施疾病简介播报编辑病鱼表现厌食,上浮于水面,表现螺旋状或旋转游动,或腹部朝上漂浮于水面,难于下沉,病鱼腹部肿大,有的鳔肿大充血,外观无其它明显病变。组织学检查可见中枢神经组织脑细胞和视网膜细胞空泡化。该病的病原属诺达病毒科(Nodaviridae)。 [2]此病毒于1989年发现,1990年首次报道。此后,在世界各地相继有3目8科15种海水养殖鱼类发生过此病。可通过水平和垂直传播,此病主要影响苗种生产期的仔鱼和幼鱼,严重者可在一周内达100%死亡,仔鱼期病鱼厌食,于水面飘游,鳔肿大,除此外无其他外观症状,死亡率极高。幼鱼期病鱼可出现螺旋式垂直游动,死亡率较仔鱼期低。组织学检查可见脑细胞和视网膜因细胞坏死和毁坏形成的空胞。电镜观察可见细胞质内球形病毒粒子,直径25~30nm,病毒基因由两段单链RNA组成,RNA1编码非结构蛋白,RAN2编码一种主要的结构蛋白。 [2]临床表现播报编辑病原为诺达病毒的p-诺达病毒。患病鱼漂游于水面,并伴随有游泳不协调、螺旋状游泳等不同的神经症状,部分鱼眼盲,体弱,不摄食,体褪色或发黑,但未见出血或糜烂。病理检查可见中枢神经系统、脊髓以及视网膜组织大量细胞形成空泡,出现神经性降解。该病主要流行在石鲷、骖、石斑鱼、红鳍东方鲀等鱼的仔鱼和幼鱼上,死亡率一般可达40%~100%,也有部分种类的成鱼会被感染。近年来,在广东养殖的青石斑鱼、紫带百斑鱼等鱼的苗种上也造成了巨大的损失。由于该病毒在海水中可存活60天以上,所以病毒可以附着在卵表面或在水中游离而感染仔鱼。PCR检测病毒阳性亲鱼的后代全部患病毒性伸经坏死病。病初步诊断可依据病理组织检查,取可疑鱼的脑网膜组织细胞或视网膜做组织切片,H-E染色,观察有无神经组织坏死、大型空泡;或用电子显微镜观察有无病毒包涵体。也用荧光抗体测试、ELLSA检测、PCR检测等方法进行快速诊断。 [2]治疗措施播报编辑①选择健康无病毒的亲鱼进行苗种培育,可用PcR法检测亲鱼的生殖腺,并检测产卵前亲鱼血浆中的抗体水平。②消毒受精卵可有效地灭活卵表面的病毒,以20毫克/升的有效碘处理15分钟,或用50毫克/升的有效碘处理5分钟;也可用臭氧处理过的海水洗卵3~5分钟。③对育苗室、育苗池和器具进行消毒处理。由于病毒对干燥和直射光有很强的耐受力,所以推荐使用消毒剂进行消毒处理。对该病毒毒有效的消毒剂主要有卤素类、乙醇类、碳酸及pH值12的强碱溶液,如用次氯酸钠50毫克/升处理10分钟。 [2]④及时捞出死鱼深埋,并进行池水消毒。新手上路成长任务编辑入门编辑规则本人编辑我有疑问内容质疑在线客服官方贴吧意见反馈投诉建议举报不良信息未通过词条申诉投诉侵权信息封禁查询与解封©2024 Baidu 使用百度前必读 | 百科协议 | 隐私政策 | 百度百科合作平台 | 京ICP证030173号 京公网安备110000020000

海院科研动态(52)| 海水鱼重要病毒性病原体-鱼类神经坏死病毒(NNV)诱发细胞不完全自噬的机制研究取得新进展_ab_virus_诱导

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海院科研动态(52)| 海水鱼重要病毒性病原体-鱼类神经坏死病毒(NNV)诱发细胞不完全自噬的机制研究取得新进展

2022-01-05 23:52

来源:

武哥说生活

原标题:海院科研动态(52)| 海水鱼重要病毒性病原体-鱼类神经坏死病毒(NNV)诱发细胞不完全自噬的机制研究取得新进展

神经坏死病毒(nervous necrosis virus, NNV)是一种广泛流行,严重危害多种海水和淡水鱼类的传染性病原体,给世界海水渔业造成巨大经济损失。我院海洋生物技术与遗传资源研究团队曾报道过NNV的新受体-热休克蛋白90ab1(heat shock protein,HSP90ab1),并揭示NNV介导HSP90ab1入侵宿主细胞的分子机制(PLoS Pathogens, Marine medaka heat shock protein 90ab1 is a receptor for red-spotted grouper nervous necrosis virus and promotes virus internalization through clathrin-mediated endocytosis, 2020)。现有研究表明,NNV能够诱导鱼类细胞发生自噬促进自身复制,但NNV在入侵阶段诱导细胞自噬的分子机制仍不清楚。

近日,该团队围绕HSP90ab1开展深入研究,发现赤点石斑鱼神经坏死病毒(red-spotted grouper NNV,RGNNV)在入侵阶段可以诱发两种鱼类细胞发生自噬。免疫共沉淀等实验结果表明,RGNNV表面的唯一结构蛋白衣壳蛋白(capsid protein,CP)与RGNNV受体海鲈HSP90ab1(LjHSP90ab1)结合可抑制AKT-MTOR信号通路,从而诱导细胞自噬发生。即,CP蛋白竞争性结合于LjHSP90ab1的NM结构域可以阻碍AKT与LjHSP90ab1的结合,从而抑制AKT-MTOR信号通路,诱发细胞自噬(图1)。该研究结果揭示了HSP90ab1在NNV感染诱导细胞自噬中的功能,为深入解析NNV的致病机制提供了新视角。

图1 RGNNV入侵阶段

诱导细胞发生不完全自噬模式图

展开全文

以上研究成果发表在中科院大类一区Top期刊《Zoological Research》(Wan-Wan Zhang, Peng Jia, Xiao-Bing Lu, Xiao-Qi Chen, Jue-Hua Weng, Kun-Tong Jia, Mei-Sheng Yi. Capsid protein from red-spotted grouper nervous necrosis virus induces incomplete autophagy by inactivating the HSP90ab1-AKT-MTOR pathway),我院张弯弯博士后为论文第一作者,易梅生教授和贾坤同副教授为共同通讯作者。该研究得到了国家自然科学基金、广州市珠江科技新星和博士后面上项目等科研项目的支持。

论文链接:https://www.zoores.ac.cn/en/article/doi/10.24272/j.issn.2095-8137.2021.249

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END

来源:海洋科学学院

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鱼类病毒性神经坏死病的病原学研究及检测方法的建立

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作者:

罗卫

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摘要:

鱼类病毒性神经坏死病(Viral nervous necrosis,VNN)又称脑病和视网膜病(Viral encephalopathy and retinopathy,VER),是由鱼类病毒性神经坏死病毒(Viralnervous necrosis virus,VNNV)引起的鱼类传染病,该病对仔鱼和幼鱼危害很大,严重者在一周内死亡率可达100%,对成鱼也有很高的致死率.由于其极高的传染性和危害性,被国际兽医组织(OIE)列为重要的鱼类病害(OIE,2001). VNNV属于诺达病毒科β诺达病毒属,是迄今发现的最小鱼类病毒.VNNV能引起尖吻鲈,赤点石斑鱼,棕点石斑鱼,巨石斑鱼,红鳍多纪鲀,条斑星鲽,牙鲆和大菱鲆等多种海水鱼类中枢神经组织和视网膜的空泡化.目前该病毒引起的疾病在除非洲以外的世界其它地方迅速蔓延开来,给各国海水养殖业造成了巨大的损失,受感染的鱼类已达40余种. 我国沿海大规模网箱养殖的石斑鱼,由于受神经坏死病毒的感染,给育苗生产带来极大的损失.然而,目前对VNN开展的研究很少,其病毒特性,检测方法,预防和治疗等方面急需进行深入的研究.鉴于这种状况,我实验室从2005年开始,对我国海水鱼类进行VNNV监测,从福建等地养殖石斑鱼体内分离到6株VNNV,并对病毒特性,VNNV检测方法,疫苗设计等方面进行了研究,主要研究内容如下: 1.收集福建,广东,海南三地渔场的患病石斑鱼苗,对石斑鱼苗做组织切片,在脑和视网膜中可见有大量的空泡.细胞敏感性实验表明病鱼组织匀浆后接种到条纹月醴细胞系(striped snakehead,SSN-1)后,有9株可以引起SSN-1产生CPE,毒株传代3天左右细胞质开始出现空泡化,接种石斑鱼吻端细胞Grouperproboscis(GP),鲤鱼上皮瘤细胞(epithelima popuasum cuprini,EPC),肥头鲤细胞(pimephales promelas,FHM)在28℃,25℃,20℃时都没有细胞病变(CPE)出现.取接种VNNV的SSN-1细胞培养物,抽提病毒总RNA进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测,有6株可扩增出VNNV特异性条带,验证了该毒株为VNNV病毒,分别编号为SSS0602-0607.脂溶剂敏感试验(氯仿处理),热敏感试验(55℃30 min),酸碱敏感试验(pH=3和pH=11各1 h)的结果表明此毒株对氯仿不敏感,对热和酸碱都比较敏感. 2.选用本室分离保存的VNNV-SSS0602作为制备免疫原的材料,与弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂乳化后,免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾脏,分离脾细胞,与瘤细胞(SP2/0)融合后,用ELISA对细胞培养上清及杂交瘤细胞诱导的腹水检测,得到了3株可以稳定分泌抗VNNV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株即2-D5,2E8和4F4.选取2E8作为包被材料建立了VNNV病原检测ELISA方法,分别用该ELISA方法对VNNV及其它鱼类病毒阳性样品检测,表明该方法具有很好的特异性.用该ELISA方法对366份临床样品进行检测,同时用RT-PCR作为对照方法,结果表明该ELISA方法的特异性和敏感性分别为97.6%和91.4%;ELISA和RT-PCR两种方法检测结果的符合率为94.3%.该方法的建立,为VNNV的快速检测提供了可靠的方法,为VNNV的控制及净化养鱼环境提供了方便.同时,该方法可以在进出境检疫中,对批量鱼样品的检测. 3.本研究根据GenBank中登录的鱼类神经坏死病毒CP基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针,通过对实时荧光RT—PCR反应条件进行优化,建立了用于检测的实时荧光RT—PCR方法.利用该方法检测鱼类神经坏死病毒及其它多种常见的水生动物RNA病毒,结果只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性.灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.2pg/μL的总RNA,与普通RT-PCR的灵敏度对比试验表明,该方法的敏感度很高.对同一样品进行检测,在组内及组间的变异系数分别为0.9%以及1.5%,证实其重复性极好,并且从抽提核酸到得出结果仅需4h.对临床500份样品进行鱼类神经坏死病毒检测,结果发现40份阳性样品.这些结果表明,本研究所建立的实时荧光RT—PCR能对鱼类神经坏死病毒进行准确,快速的检测,具有特异性好,灵敏度高的优点. 4.从本室分离到的6株VNNV提取病毒基因组RNA.根据已报道的RNA2片段全序列设计引物,用RT-PCR方法特异性扩增出6株病毒的衣壳蛋白基因片段,分别连接到PMD18-T载体中,并进行序列测定和分析.结果发现,6个VNNV分离株的RNA2片段核苷酸序列的同源性在96.1%以上;推导的氨基酸序列同源性在79.6%-99.1%之间.根据RNA2片段核苷酸序列绘制的分子进化树表明,6个VNNV分离株在进化树同一分枝上,属于RGNNV基因型,与已报道的点带石斑鱼神经坏死病病毒(ECNNV),巨石斑鱼神经坏死病病毒(ETNNV)及玛拉巴石斑鱼神经坏死病病毒(MGNNV)亲缘关系较近.试验结果表明,我国沿海养殖场发生的鱼类病毒性神经坏死病均由同一来源的病毒引起的,该基因型的鱼类神经坏死病毒在我国沿海养殖的石斑鱼中传播流行,并造成了较大的经济损失. 5.利用RT-PCR技术获得病毒性神经坏死病毒0603株的衣壳蛋白基因,将其插入到杆状病毒Bac-To-Bae表达系统的pFastBacⅠ质粒中,构建了pFastBac-cp质粒,转化DH_(10)Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-cp,脂质体介导转染Sf9细胞产生有感染力的重组杆状病毒AcNPV-cp.SDS-PAGE和Western-blotting分析可见大小约为37kD的特异性蛋白带,其可以与病毒性神经坏死病毒阳性血清反应,表明AcNPV-cp在Sf9细胞中成功地表达了病毒性神经坏死病毒的衣壳蛋白.电镜观察发现,CP蛋白可自行装配成病毒样粒子,其大小形态类似全病毒,并呈晶格状排列在细胞质中.

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关键词:

鱼类病毒性神经坏死病

鱼类病毒性神经坏死病病毒

单克隆抗体

ELISA

荧光RT-PCR

CP基因

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Aquature在线刊发一株新的神经坏死病毒CNPgg2018株的分离与鉴定

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神经坏死病毒( nervous necrosis virus,NNV) 是一种世界范围内流行、严重危害多种海水和淡水鱼类的传染性病原。本研究从山东省烟台市某养殖场采集到患病珍珠龙胆石斑鱼幼鱼,通过组织病理检查、TEM观察、RT-PCR检测、细胞分离培养、全基因组扩增、系统发育分析等,分离获得一株病毒,并对其进行鉴定。结果显示,患病石斑鱼视网膜及脑组织中存在大量空泡化病变。TEM观察发现,患病幼鱼视网膜和浓缩的病毒液中均存在大量直径25 nm左右,呈二十面体的病毒粒子。RT-PCR结果显示,仅使用针对NNV的特异性引物可扩增出大小约255bp的特异性条带,经BLAST比对分析,扩增产物与 GenBank 中公布的多株NNV RNA2基因有极高相似性。接种组织匀浆液后,SSN-1和GB细胞出现了典型的细胞病变效应(CPE)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱显示,该病毒有明显的2条蛋白带。克隆获得其RNA1与RNA2序列,基于RNA2的系统进化树结果表明,该毒株与15株已报道的NNV聚为一支,均属于石斑鱼神经坏死病毒型(RGNNV)。综合实验结果可以确认该病毒为一株基因型为RGNNV型的神经坏死病毒,并将其命名为CNPgg2018株。成果于2020年7月6日发表在领域著名刊物Aquaculture上(doi:10.1016/j.aquaculture.2020.735663,IF=4.242)。该项研究的第一完成人为邢婧教授,通讯作者为战文斌教授。该研究得到国家重点研发计划(2019YFD0900101,2019YFD0900102,2018YFD0900503)、国家自然科学基金(31730101,31672684,1672685)等项目的联合支持。

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石斑鱼病毒性神经坏死病研究

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陈信忠

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应用流行病学调查方法,对福建南部地区海水养殖石斑鱼近年来日益严重的暴发性传染病进行调查和研究.首次阐明了该地区养殖石斑鱼传染病的主要种类及其流行病学特征,病毒性神经坏死病(viral nervous necrosis,VNN)是该地区最常见,危害也最大的传染病,常导致大批石斑鱼鱼苗和幼体发病死亡.该传染病具有典型的神经症状,游动异常,中枢神经和视网膜组织出现空泡坏死病变.病鱼除了神经异常外,无其它临床病症,体表及体内也无明显的病理变化或寄生虫寄生.该病通过鱼卵行垂直传播,也可经养殖水体行水平传播.来自受感染亲鱼的垂直传播是鱼苗感染的主要途径.各种石斑鱼以及不同日龄的石斑鱼均易感,但对幼体的危害更严重.该病具有明显的季节性,通常每年的4-8月份为发病高峰期.从发病的石斑鱼分离出溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus),副溶血弧菌( V. parahaemolyticus)和河流弧菌(V. fluvialis)等10株病原菌,大多为继发感染的条件致病菌,加剧了病情,导致更多石斑鱼死亡.匹里虫(Pleistophora)和本尼登虫(Benedenia)是石斑鱼最常见的寄生虫,由于这些虫的寄生导致石斑鱼免疫力和抵抗力降低,容易引发其它传染性病原的感染. 在国内首次建立了逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测鱼类神经坏死病毒(NNV)的检测操作规程,并应用到传染病调查和厦门口岸进出境鱼类病害检疫中.同时,用组织切片法对石斑鱼脑部和视网膜的特征性病变进行验证,证明该方法是一种快速,简便,准确的检测方法.应用该方法对厦门地区网箱养殖的鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus),点带石斑鱼(E. malabaricus),青石斑鱼(E. awoara),赤点石斑鱼(E. akaara )和云纹石斑鱼(E. moara)等5种石斑鱼共100多份样品进行检测,NNV平均检出率约90%.对上述5种石斑鱼的NNV PCR扩增产物进行核酸测序和同源性比较,同源性超过99%,与基因库中其它石斑鱼的NNV的同源性也大于97%.石

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关键词:

石斑鱼

神经坏死病毒

快速检测

基因组测定

学位级别:

博士

学位年度:

2006

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http://dspace.xmu.edu.cn:8080/dspace/handle/2288/53384

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Capsid protein from red-spotted grouper nervous necrosis virus induces incomplete autophagy by inactivating the HSP90ab1-AKT-MTOR pathway - PubMed

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doi: 10.24272/j.issn.2095-8137.2021.249.

Capsid protein from red-spotted grouper nervous necrosis virus induces incomplete autophagy by inactivating the HSP90ab1-AKT-MTOR pathway

Wan-Wan Zhang 

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1 School of Marine Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou, Guangdong 510000, China.

2 Southern Marine Science and Engineering Guangdong Laboratory (Zhuhai), Zhuhai, Guangdong 519000, China.

3 Guangdong Provincial Key Laboratory of Marine Resources and Coastal Engineering, Guangzhou, Guangdong 510000, China.

4 Pearl River Estuary Marine Ecosystem Research Station, Ministry of Education, Zhuhai, Guangdong 519000, China.

5 Pearl River Estuary Marine Ecosystem Research Station, Ministry of Education, Zhuhai, Guangdong 519000, China. E-mail: jiakt3@mail.sysu.edu.cn.

6 Pearl River Estuary Marine Ecosystem Research Station, Ministry of Education, Zhuhai, Guangdong 519000, China. E-mail:yimsh@mail.sysu.edu.cn.

PMID:

34904422

PMCID:

PMC8743256

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10.24272/j.issn.2095-8137.2021.249

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Capsid protein from red-spotted grouper nervous necrosis virus induces incomplete autophagy by inactivating the HSP90ab1-AKT-MTOR pathway

Wan-Wan Zhang et al.

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doi: 10.24272/j.issn.2095-8137.2021.249.

Authors

Wan-Wan Zhang 

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, Peng Jia 

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, Xiao-Bing Lu 

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, Kun-Tong Jia 

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, Mei-Sheng Yi 

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1 School of Marine Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou, Guangdong 510000, China.

2 Southern Marine Science and Engineering Guangdong Laboratory (Zhuhai), Zhuhai, Guangdong 519000, China.

3 Guangdong Provincial Key Laboratory of Marine Resources and Coastal Engineering, Guangzhou, Guangdong 510000, China.

4 Pearl River Estuary Marine Ecosystem Research Station, Ministry of Education, Zhuhai, Guangdong 519000, China.

5 Pearl River Estuary Marine Ecosystem Research Station, Ministry of Education, Zhuhai, Guangdong 519000, China. E-mail: jiakt3@mail.sysu.edu.cn.

6 Pearl River Estuary Marine Ecosystem Research Station, Ministry of Education, Zhuhai, Guangdong 519000, China. E-mail:yimsh@mail.sysu.edu.cn.

PMID:

34904422

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As a highly important fish virus, nervous necrosis virus (NNV) has caused severe economic losses to the aquaculture industry worldwide. Autophagy, an evolutionarily conserved intracellular degradation process, is involved in the pathogenesis of several viruses. Although NNV can induce autophagy to facilitate infection in grouper fish spleen cells, how it initiates and mediates autophagy pathways during the initial stage of infection is still unclear. Here, we found that red-spotted grouper NNV (RGNNV) induced autophagosome formation in two fish cell lines at 1.5 and 3 h post infection, indicating that autophagy is activated upon entry of RGNNV. Moreover, autophagic detection showed that RGNNV entry induced incomplete autophagy by impairing the fusion of autophagosomes with lysosomes. Further investigation revealed that binding of the RGNNV capsid protein (CP) to the Lateolabrax japonicus heat shock protein HSP90ab1 (LjHSP90ab1), a cell surface receptor of RGNNV, contributed to RGNNV invasion-induced autophagy. Finally, we found that CP blocked the interaction of L. japonicus protein kinase B (AKT) with LjHSP90ab1 by competitively binding the NM domain of LjHSP90ab1 to inhibit the AKT-mechanistic target of the rapamycin (MTOR) pathway. This study provides novel insight into the relationship between NNV receptors and autophagy, which may help clarify the pathogenesis of NNV.

神经坏死病毒(nervous necrosis virus, NNV)可感染多种重要海淡水经济鱼类,给水产养殖业造成巨大经济损失。自噬是一种进化上保守的依赖于溶酶体的细胞物质降解途径,参与多种病毒感染过程。研究表明,NNV能够诱导鱼类细胞发生自噬促进自身复制,但NNV在入侵阶段诱导细胞自噬的分子机制尚不清楚。在该研究中,我们发现在2种鱼类细胞中赤点石斑鱼神经坏死病毒(red-spotted grouper NNV,RGNNV)都能够在感染1.5和3 h时诱导自噬小体形成,表明RGNNV入侵阶段即可诱发细胞自噬。进一步研究发现RGNNV感染能够抑制自噬溶酶体和自噬小体融合,表明RGNNV入侵阶段诱导细胞发生不完全自噬。随后研究发现RGNNV表面的唯一结构蛋白衣壳蛋白(capsid protein,CP)通过与RGNNV受体海鲈热休克蛋白90ab1(heat shock protein HSP90ab1,LjHSP90ab1)结合抑制AKT-MTOR信号通路,从而诱导细胞自噬发生。机制研究表明CP蛋白竞争性结合于LjHSP90ab1的NM结构域以阻碍AKT与LjHSP90ab1的结合,从而抑制AKT-MTOR信号通路,诱导细胞自噬发生。综上所述,RGNNV在入侵阶段利用CP结合其受体HSP90ab1,进而抑制AKT-MTOR信号通路,诱导细胞不完全自噬。该研究揭示了NNV受体在病毒感染诱导细胞自噬中的功能,为深入解析NNV感染的致病机制提供了新视角。.

Keywords:

AKT-MTOR pathway; Autophagy; CP; HSP90ab1; NNV.

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Figure 1

Characterization of RGNNV entry-triggered autophagosome…

Figure 1

Characterization of RGNNV entry-triggered autophagosome accumulation

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Characterization of RGNNV entry-triggered autophagosome accumulation

Figure 2

RGNNV induced incomplete autophagy

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RGNNV induced incomplete autophagy

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RGNNV induced incomplete autophagy

Figure 3

CP was sufficient for RGNNV…

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CP was sufficient for RGNNV to induce autophagy

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CP was sufficient for RGNNV to induce autophagy

Figure 4

LjHSP90ab1 was responsible for RGNNV…

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LjHSP90ab1 was responsible for RGNNV entry-induced autophagy

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LjHSP90ab1 was responsible for RGNNV entry-induced autophagy

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RGNNV induced autophagy at early…

Figure 5

RGNNV induced autophagy at early infection stage by inhibiting AKT-MTOR pathway

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RGNNV induced autophagy at early infection stage by inhibiting AKT-MTOR pathway

Figure 6

Figure 6

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Figure 7

CP attenuated interactions between LjHSP90ab1…

Figure 7

CP attenuated interactions between LjHSP90ab1 and AKT

Figure 7

CP attenuated interactions between LjHSP90ab1 and AKT

Figure 8

Proposed model for RGNNV entry-induced…

Figure 8

Proposed model for RGNNV entry-induced autophagy by blocking HSP90ab1/AKT/MTOR axis in LJB cells

Figure 8

Proposed model for RGNNV entry-induced autophagy by blocking HSP90ab1/AKT/MTOR axis in LJB cells

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赤点石斑鱼抗神经坏死病的基因组选择评估

赤点石斑鱼抗神经坏死病的基因组选择评估

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主管:福建省海洋与渔业局

主办:福建省水产学会,福建省水产研究所

ISSN 2096-9848   CN 35-1331/S

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渔业研究 ›› 2022, Vol. 44 ›› Issue (3): 205-212.DOI: 10.14012/j.cnki.fjsc.2022.03.001

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赤点石斑鱼抗神经坏死病的基因组选择评估

王卓标1,方铭1,郑乐云2,葛辉2,陈欣欣2,罗辉玉2,王志勇1*

  

1. 集美大学水产学院,农业农村部东海海水健康与养殖重点实验室,福建 厦门 361021

2.福建省水产研究所,福建省海洋生物增养殖与高值化利用重点实验室,福建 厦门 361013

收稿日期:2022-04-22

修回日期:2022-05-08

出版日期:2022-06-25

发布日期:2022-07-01

通讯作者:

王志勇 ( 1963-) ,男,教授,博导,从事水产动物遗传与育种研究. E-mail: zywan@ jmu.edu.cn

作者简介:王卓标 ( 1997-) ,男,硕士研究生,从事水产动物遗传与育种研究. E-mail: 842207943@qq.com

基金资助:福建省科技计划项目(2019R1013);海水鱼产业技术体系项目(CARS-47-G04)

Evaluation of genomic selection against neuronecrosis in the red-spotted grouper

Received:2022-04-22

Revised:2022-05-08

Online:2022-06-25

Published:2022-07-01

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摘要/Abstract

摘要: 赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)是中国东南沿海地区一种重要的海水养殖鱼类,多年来其苗种生产深受神经坏死病的困扰,严重制约了其人工养殖业的发展。本研究采集230尾赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV)易感(染病死亡)和230尾抗性(最终健康存活)赤点石斑鱼苗进行基因组重测序,分析获得5 412 683个单核苷酸多态性(SNPs)位点的基因型,并以之对抗病性状进行了遗传评估和基因组选择研究,获得的估计遗传力均值为0.566 2,预测基因组估计育种值(GEBV)均值为0.154 3。随机选择不同数量标记对基因组选择准确性影响进行评估,结果表明,采用5 000个(5 k)标记进行赤点石斑鱼抗神经坏死病性状遗传评估就可以获得比较理想的效果。本研究为开展赤点石斑鱼抗神经坏死病基因组选择育种实践提供了有用的理论参考。

关键词:

赤点石斑鱼,

基因组选择,

基因组最佳线性无偏预测(GBLUP)

Abstract: Red-spotted grouper (Epinephelus akaara) is an important maricultured fish in the southeast coastal area of China. It is highly infected by red-spotted grouper nerve necrosis virus (RGNNV) during the artificial cultivation, which seriously restricted the development of the artificial breeding industry. In this study, 230 ind RGNNV susceptible (disease-infected death) and 230 ind resistant (eventually survived fish) red-spotted grouper fry were collected for genome resequencing, and 5 412 683 single nucleotide polymorphisms (SNPs) were discovered, which were used for genetic evaluation of the RGNNV resistance of the red-spotted grouper. The estimated heritability of RGNNV was 0.566 2, and the accuracy of the genomic estimated breeding value (GEBV) with whole genome SNPs markers was 0.154 3. The evaluation of the effect of random selection of different numbers of markers on the genomic prediction accuracy showed that using ≥5 000 (5 k) SNP markers could obtain more desirable results. This study provided a useful theoretical reference for application of genomic selection for breeding of red-spotted grouper against RGNNV.

Key words:

red-spotted grouper,

genomic selection,

genomic best liner unbiased prediction (GBLUP)

中图分类号: 

S943

引用本文

王卓标 方铭 郑乐云 葛辉 陈欣欣 罗辉玉 王志勇. 赤点石斑鱼抗神经坏死病的基因组选择评估[J]. 渔业研究, 2022, 44(3): 205-212.

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